CRISPR基因编辑技术

       在植物基因功能研究中，反向植物遗传学是经典的研究思路之一，通常从一个基因入手，通过过表达、干扰或基因编辑等手段调节一个或多个基因的表达水平，观察对应的表型变化，从而对相关基因进行一系列的分子功能研究。
       基因编辑技术主要是利用序列特异性核酸酶在特定基因位点产生DNA双链断裂，借助编辑受体自身的DNA修复系统在非同源末端连接（Non-homologous end joining，NHEJ）过程中产生随机的Indels （Small insertions and deletions）或在同源重组修复过程中插入或替换相应的基因片段，最终实现基因组序列的突变。现有的基因编辑系统主要包括锌指核酸酶（Zinc finger nucleases，ZFNs）系统、类转录激活因子效应物核酸酶（Transcription activator-like effector nucleases，TALENs）系统以及CRISPR/Cas（Clustered regu­larly interspaced short palindromic repeat-associated protein）系统，其中，CRISPR/Cas系统由于载体构建过程简单、编辑效率高等优点，成为当前广泛应用的主流基因编辑系统。2020年，Emmanuelle Charpentier和Jennifer A. Doudna两位科学家获得了诺贝尔化学奖，以表彰她们在“开发CRISPR/Cas基因组编辑方法”方面作出的贡献。

服务流程

客户在线下单—订单/实验材料确认—CloneCAD实验设计—基因编辑载体构建—遗传转化—PCR鉴定阳性株系（后两步为可选项）

服务内容及说明

       在植物体系中，我司目前主要使用自主研发并改造后的pCAMBIA系列载体。
       我司原始基因编辑载体为双元载体，并携带卡纳原核抗性和真核筛选标记（可选潮霉素、Basta或G418进行筛选）。我们可以针对您想要编辑的靶序列，分析序列的各项参数后设计引物，选择最合适的原始基因编辑载体，退火合成靶序列，再连入原始载体， 得到重组子后直接进行遗传转化实验。

我司部分原始基因编辑载体列表。可根据不同的需求，选择不同的启动子及真核抗性的载体。

适用场景

1、 功能基因的敲除；
2、 非编码区的编辑，例如对启动子、microRNA、lncRNA的基因序列进行编辑；
3、 单碱基编辑、精准碱基编辑；
4、 非同源/同源多基因敲除、代谢通路多基因敲除；
5、 大片段删除。

优势特点

1、 采用我司已被授权的国际PCT专利技术（专利号：US 10,144,936 B2）来进行sgRNA的片段组装及无缝组装，同时，对于单个、 多个sgRNA序列均可进行组装；
2、 载体资源丰富，根据您研究的物种、靶序列，均有对应经多次编辑效率测试后的最优原始载体骨架推荐，也可个性化订制您有其它需求的基因编辑载体；
3、 基因编辑载体库中有多种真核筛选标记（可选潮霉素、Basta或G418进行筛选）的原始载体可供选择，同时，多基因编辑、单碱基编辑、精准碱基编辑等特殊基因编辑系统也可满足您的特殊实验需求；
4、 载体均为双元载体，可直接应用于后期单子叶和双子叶遗传转化；
5、 可以与我司转基因服务、检测服务、蛋白服务等衔接，整个实验可以畅通且快速地完成。

实验周期

5-7个工作日

样品接收标准

客户下单及项目信息填写：

请客户按照页面提示填写项目名称，选择项目类型[CRISPR/Cas基因组编辑载体]、项目所需要的具体信息，价格由系统自动计算。

实验信息

在实验开始、结题关键节点系统会自动发送短信到申请人手机进行告知，实验过程中客户可以随时登录客户管理系统査看项目实时进展情况。实验结题后，实验报告、检测结果可在线査看，并永久保留。实验过程用到的菌株、载体、受体材料免费为客户保存半年后销毁。

结题标准

目的片段构建至目的载体上（俗称“构建成功”）。

实验交付内容

1、重组载体的全序列信息和注释信息；
2、重组载体的酶切图谱；
3、重组载体的测序结果；
4、重组载体：一份质粒、一份大肠杆菌菌液（25%甘油菌）；
5、如果需要转化农杆菌
1）2份农杆菌菌液（25%甘油菌）
2）农杆菌的检测图片。

文献举例

图 与野生型相比，nor-like基因的两个突变株系的果实成熟时间大大延迟（Gao et al.，2018）。